藻红蛋白(Phycocyanin, PC)和藻蓝蛋白(Phycoerythrin, PE)是藻类中两种主要的色素蛋白,广泛存在于蓝藻、红藻和某些绿藻中。它们在光合作用中起着捕光和能量传递的及其重要的作用,同时也具有抗氧化、免疫调节等多种生物活性。因此,准确测定藻红蛋白和藻蓝蛋白的含量对于藻类生理研究、生物技术应用以及环境监视测定具备极其重大意义。
分光光度法是一种基于物质对特定波长光的吸收特性进行定量分析的方法,因其操作简单便捷、成本低而被大范围的应用于藻类色素蛋白的含量测定。然而,传统分光光度法在准确性、精密度和线性范围等方面存在一定的局限性。本文综述了分光光度法测定藻红蛋白和藻蓝蛋白含量的优化技巧,包括样品处理、显色剂选择、波长优化等方面,旨在为科研人员提供实用的参考,提高测定的准确性和可靠性。
:将藻类样本置于冰浴中,使用超声波破碎仪进行破碎,功率设置为200W,每次超声30秒,间隔30秒,重复3-5次。超声破碎可以有明显效果地破坏藻类细胞壁,释放出藻红蛋白和藻蓝蛋白。
:对于难以破碎的藻类,能够正常的使用液氮冷冻研磨法。将藻类样本在液氮中冷冻后,用研钵和研杵进行研磨,直至样本完全破碎。
:将破碎后的藻类样本加入适量的提取缓冲液(如50 mM Tris-HCl,pH 7.5,含1 mM EDTA和1 mM PMSF),在4℃下搅拌提取30分钟,然后以12,000 g离心10分钟,取上清液备用。
:为了去除杂质,能够正常的使用Sephadex G-25凝胶柱进行纯化。将提取液通过凝胶柱,用20 mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)洗脱,收集含有藻红蛋白和藻蓝蛋白的洗脱峰。
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